1. Preparo dos Oócitos para ICSI

Os oócitos são coletados em um tubo Falcon ( 3037 ) previamente aquecido e o líquido folicular é imediatamente enviado ao laboratório de embriologia, onde, através de um estereomicroscópio, serão identificados e posteriormente classificados. Após a identificação, os oócitos são colocados em 1,0 ml de hialuronidase 80 UI/ml ( Hyase 1 ) por 30 segundos, fazendo um movimento de entra e sai com pipeta Pasteur. Logo após, lavar diversas vezes em meio IVF 50 e colocar em uma placa de Petri com microgotas de 50 µl do meio de cultura IVF 50 e cobrir com óleo mineral ( Ovoil 150 ) previamente equilibrado.

Incubar em estufa por no mínimo 20 minutos até a hora da desnudação ( limpeza do cumulus ) dos oócitos. No final do período de incubação o complexo cumulus-corona é removido mecanicamente com uma pipeta acoplada a um pipetador ( Stripper ). O calibre dessa pipeta de desnudação é de 125 µm. Os oócitos são classificados em metafase II ( oócitos maduros com presença do 1º corpúsculo polar ), metafase I ( oócitos imaturos sem presença de corpúsculo polar ), prófase I ( oócitos imaturos com presença de vesícula germinativa ), atréticos ( oócitos apresentando processo de degeneração ) e fraturados ( oócitos com dano no citoplasma e/ou zona pelúcida ). Essa classificação é feita através da observação dos oócitos desnudados no microscópio invertido ( Nikon- Eclipse ) com 200 a 400X de aumento. A microinjeção é feita nos oócitos em estágio de metafase II ( MII ) até 4 horas após a coleta. Os oócitos em metafase I ( MI ) permanecem em cultura até a extrusão do 1º corpúsculo polar ( 4 a 6 horas após a aspiração ).