3. Preparo para Microinjeção

Em uma placa de Petri Falcon (1006), são colocadas 1 gota central de 5ml de ICSI 100 ( para imobilizar os espermatozóides ) rodeadas por 8 gotas de 5ml de meio de injeção Gamete 100 e cobertas com óleo mineral OVOIL 150. São colocados no ICSI 100 , 1-2ml da amostra seminal já capacitada e nas gotas ao redor 1 oócito em cada gota.

O procedimento do ICSI é realizado sobre uma platina aquecedora à 37°C acoplada ao microscópio invertido Nikon (Eclipse) com aumento de 200-400X , usando um contraste de fase Hoffman. O microscópio é equipado com sistema de videocâmera e monitor de vídeo onde o procedimento pode ser acompanhado.

Um único espermatozóide é selecionado e imobilizado mecanicamente com uma leve pressão da pipeta de injeção sobre a sua cauda. A cauda é então aspirada para dentro da pipeta de injeção.

Com a pipeta de sucção ("holding" ) , o primeiro corpúsculo polar é colocado na posição de 6 horas ( dependendo da abertura da agulha de injeção ). O oócito é então fixado com uma pequena sucção da pipeta de "holding". Com apenas 1 espermatozóide imobilizado dentro da pipeta de injeção, injeta-se em posição de 3 horas. Após a introdução da pipeta dentro do ooplasma o mesmo é levemente aspirado para certificação da quebra da membrana citoplasmática e ,logo após a quebra, o espermatozóide é colocado juntamente com o ooplasma.

Após a injeção , os oócitos são lavados em meio IVF 50 e colocados juntos em uma placa de Petri com centro Falcon (3037) com 1 ml de meio IVF 50 coberto com óleo mineral e colocados na incubadora até a verificação da fertilização.